Введение
Список сокращений 2
Актуальность 10
Цель работы 13
Задачи 13
Научная новизна 14
Положения, выносимые на защиту 15
ГЛАВА 1 Поверхностные белки-мишени клеток, образующих гематоэнцефалический барьер, и адресная терапия низкодифференцированных глиом (обзор литературы). 17
Введение 17
Методология поиска новых белков ЭЦМ 18
Маркеры эндотелия церебральных микрососудов 21
Базиджин (НТ7, 5А11, CD147, Мб, EMMPRIN, 0X47) 21
Эндотелиальный барьерный антиген (ЕВА) 25
Перицит-ассоциированный 140 кДа антиген (аминопептидаза-N) 29
Кавеолины 30
Трансферриновый рецептор (CD71) 32
Ферментные и транспортные системы церебральных эндотелиоцитов у-Глутамилтранспептидаза 36
Переносчики глюкозы из семейства GLUT 38
Транспортеры аминокислот 40
Транспортеры органических анионов семейства ОАТР 41
Монокарбоксильные транспортеры (МСТ) 45
Транспортер активного выброса (Р-гликопротеин, MDR1) 46
Белки межклеточных контактов структур ГЭБ 49
Белки плотных контактов 49
Белки щелевых контактов 57
Изменения поверхностных белков ЭЦМ при патологии ГЭБ 60 Моноклональные антитела к белкам-мишеням для диагностики и терапии
низкодифференцированных глиом 61
Общие аспекты адресной терапии глиом с помощью моноклональных антител 63
Адресная терапия с помощью антител к рецепторам факторов роста 64
Адресная радиоиммунотерапия с помощью антител к белкам внеклеточного матрикса...69
Перспективы адресной терапии с помощью антител к эндотелиальным антигенам
опухолевых микрососудов 72
Адресная доставка наноконтейнерных форм цитостатических препаратов 75
Активная загрузка наноконтейнеров цитостатиками 77
Контролируемое высвобождение активного вещества 80
Придание наноконтейнерам «векторных» свойств 82
Заключение 85
ГЛАВА 2 Материалы и методы исследования 90
Препаративные методы вьщеления и очистки нативных мембранных белков церебральных
эндотелиоцитов 90
Выделение фракции церебральных микрососудов 90
Солюбилизация мембранных белков 91
Фракционирование и очистка мембранных белков 92
Дизайн рекомбинантных внеклеточных фрагментов BSAT1, Сх43 и VEGFR1 (sFlt) а также рекомбинантного VEGF 92
Первичная структура и мембранная топология внеклеточных фрагментов
исследуемых белков 93
Клонирование и экспрессия внеклеточных фрагментов В SAT 1 и Сх43 95
Методы анализа полученных нативных и рекомбинантных белков 100
Определение концентрации ДНК и белка 100
Диск-электрофорез в ПААГ с SDS 101
Иммуноблоттинг 103
Иммуноферментный анализ 103
Лиганд-рецепторный анализ 105
